C-hepatiidi PCR-analüüsi tulemuste kvalitatiivne tõlgendamine

Arvestades asümptomaatilist kulgu ja HCV nakkuse ülekandumise suurt tõenäosust, on diagnoosimine patoloogia varajastes staadiumides suurt tähtsust. Kõige täpsem on polümeraasi ahelreaktsiooni formuleerimine. Erinevalt seroloogiliste markerite tuvastamise meetoditest sõltub PCR vähe kaasuvatest haigustest ja patsiendi keha üldisest seisundist. Kuid kui C-hepatiidi viirus leiab kinnitust, on kvantitatiivne analüüs, mille dekodeerimise teostab arst.

HCV on tõsine haigus, mis nõuab tõsiseid kalleid ja ohtlikke raviga seotud kõrvaltoimeid. Seetõttu ei tehta diagnoosi kunagi ühe uuringu tulemuste põhjal. Viirushaiguse kahtluse korral peab patsient läbima mitu testi. Kuid selleks, et vältida tarbetuid kulusid ja ajakulu, tehakse vereanalüüse ja instrumentaalseid uuringuid etappide kaupa.

Diagnostilise protsessi peamised etapid on toodud tabelis:

Pidev uurimistööTulemuslikkuse eesmärgid
Vere- ja maksatestide biokeemiline analüüsVõimaldab teil hinnata maksa funktsionaalset aktiivsust, bilirubiini taset, maksa transaminaaside näitajaid. Normi ​​ületamine 2 või enam korda näitab haiguse esinemist
Vere, uriini ja väljaheidete kliinilised testidNeed uuringud on mittespetsiifilised, kuid tulemuste abil saab kindlaks teha põletikulise protsessi olemasolu, hinnata patsiendi üldist seisundit. Bilirubiini tuvastamine uriinis, väljaheidete värvuse muutus räägib maksakahjustuste kasuks
Ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs (ELISA)See võimaldab teil määrata nii viirusliku infektsiooni olemasolu kehas kui ka selle vormi (äge või krooniline). Uuringu puuduseks on valede tulemuste tõenäosus.
Polümeraasi ahelreaktsioonKallis, raskesti juhitav, kuid samal ajal HCV kõige täpsem diagnostiline meetod. See võimaldab teil kinnitada viiruse esinemist inimkehas, kvantifitseerida RNA koopiate taset, määrata HCV genotüüp
Maksa instrumentaalsed uuringudOn vaja läbi viia kõhuorganite ultraheli, kindlaks teha fibroosi staadium, hinnata tsirroosi raskust, välistada hepatotsellulaarne kartsinoom

Arst teeb lõpliku diagnoosi ainult vastavalt kõigi uuringute tulemustele. Mõningaid ravimeid, näiteks hepatoprotektoreid, vitamiine, näidatakse juba diagnostilise protsessi alguses. Kuid pärast kõigi andmete saamist on ette nähtud suunatud viirusevastased ained.

Mis on PCR?

Polümeraasi ahelreaktsiooni tehnika on olnud teada juba pikka aega ja seda on edukalt kasutatud paljude viirushaiguste diagnoosimisel ning HCV ei ole erand.

Praegu on PCR-i seadistamiseks mitu meetodit, kuid põhimõtteliselt koosneb see protsess mitmest etapist:

  1. DNA kaheahelaline hävitamine kuumuse või teatud kemikaalide mõjul.
  2. Ühendades niinimetatud praimerid, viiruse RNA nukleotiidahela jäägid DNA alusega eraldatud DNA-ga (enamikes tänapäevastes katsesüsteemides kasutatakse HCV genoomi 5`-NTR piirkondi).
  3. Spetsiifiline ensüüm, DNA polümeraas, tunneb ära praimeri, provotseerib teiste nukleotiidijääkide lisamist.

Polümeraasi ahelreaktsiooni kolmanda etapi lõpus kahekordistub kahe praimeri vaheline DNA ja seejärel amplifitseeritakse genoom eksponentsiaalselt (2–4–8 jne)..

Kaasaegsete katsesüsteemide tundlikkus on 10-50 RNA koopiat 1 ml veres.

C-hepatiidi PCR-i dekodeerimine peaks toimuma kvalifitseeritud spetsialisti poolt. Kooskõlas WHO rahvusvahelise standardiga kasutatakse viiruse genoomi kvantifitseerimiseks lüofiliseeritud vereplasma proovi, mis sisaldab esimese viiruse genotüübi RNA kontsentratsioonis 105 RÜ / ml.

Samal ajal juhitakse tähelepanu kvantitatiivsetele ühikutele, milles uurimistulemusi väljendatakse. Tavaliselt on HCV RNA koopiate arv näidatud absoluutselt või logaritmiliselt. Seejärel teisendatakse see arv vastavalt rahvusvahelistele standarditele spetsiaalse koefitsiendi abil rahvusvahelisteks ühikuteks (RÜ). Seega on lõplikud tulemused näidatud RÜ / ml.

Kvantitatiivse uuringu läbiviimiseks kasutatakse polümeraasi ahelreaktsiooni formuleerimiseks erinevaid katsesüsteeme ja meetodeid. Mõned neist on mõeldud plasma või seerumi vireemia mõõtmiseks. Teised on täisvere uurimisel efektiivsemad ja suunavamad..

Normist rääkimine labori vormis näidatud tulemuste tõlgendamisel ei ole täiesti õige. Fakt on see, et tervel inimesel pole viiruse RNA-d kehas ja HCV osakeste olemasolu, sõltumata kvantitatiivsest indikaatorist, näitab nakatumist. Tulevikus kasutatakse PCR-i ravi efektiivsuse hindamiseks. Negatiivse tulemusega 4 nädalat pärast ravimi kasutamist ja pärast viirusevastase ravi lõppu (48 nädalat) räägivad taastumisest.

Uurimistöö liigid

Polümeraasi ahelreaktsiooni läbiviimine hõlmab mitte ainult HCV RNA olemasolu määramist veres, vaid ka viiruse koopiate arvu määramist ja genoomi struktuuri analüüsimist. Sellised võimalused muudavad PCRi üheks kõige informatiivsemaks ja täpsemaks meetodiks C-viirushepatiidi diagnoosimisel.

Kõik polümeraasi ahelreaktsiooni formuleerimise praktilised meetodid on esitatud allpool toimimisjärjestuses (iga järgmine test on ette nähtud eelneva positiivse tulemusega):

  1. C-hepatiidi kõrgekvaliteediline PCR-analüüs viiakse läbi ainult viiruse RNA tuvastamiseks veres.
  2. Kvantitatiivne PCR-test. Dekrüptimine toimub vastavalt üldtunnustatud standarditele. Sõltuvalt tulemusest võib viroloogiline koormus olla madal, mõõdukas või kõrge. See indikaator on üks HCV ravi tulemuste ennustajaid..
  3. Genotüpiseerimine (paljudes eralaborites pakutakse seda koos kvantitatiivse analüüsiga, mis vähendab kogukulusid). HCV genotüübi tähistamiseks kasutatakse ühte araabia numbrit (1 kuni 6). Venemaa territooriumil tuvastatakse sagedamini 1. või 3. genotüüp, mõnevõrra harvem - üksikjuhtudel diagnoositakse 2, 4–6. Varem määrasid interferoonravi režiimide kasutamisel mitmesugused HCV-d ravi kestuse ja efektiivsuse. Kaasaegsetel viirusevastastel ainetel on lai toime spekter, kuid mõned neist on ette nähtud ainult 1–4 HCV genotüübiga.

Enne ravi alustamist viiakse genotüüp läbi ainult üks kord. Ravimite võtmise ajal on arst vajalik viirusevastaste ravimite tõhususe hindamiseks C-hepatiidi kvantitatiivsed normid. Pärast ravikuuri viiakse läbi kvalitatiivne PCR-uuring..

Kvantitatiivse analüüsi omadused

Viiruse koormuse määramiseks viiakse läbi kvantitatiivne analüüs PCR abil. Selle termini all mõeldakse patogeeni RNA koopiate arvu 1 ml veres.

Tänu sellisele uuringule saab arst hinnata mitmeid tegureid, millel on võtmeroll nii haiguse kulul kui ka ravi tulemusel. See:

  • komplikatsioonide tõenäosus (tsirroos ja hepatotsellulaarne kartsinoom), kuna mida aktiivsem on patoloogiline protsess, seda suurem on C-hepatiidi algstaadiumis maksapatoloogiate oht;
  • standardse ravirežiimi tõhusus (rasketel juhtudel on vajalik viirusevastaste ravimite täiendav väljakirjutamine);
  • risk teistele (eriti kui patsient kuulub sotsiaalselt ohututesse elanikkonnarühmadesse, tal on perekond, lapsed);
  • ekstrahepaatiliste komplikatsioonide oht (autoimmuunhaiguste teke, närvi-, kardiovaskulaarsüsteemi kahjustus jne).

Ravi efektiivsuse jälgimisel on oluline ka HCV RNA kvantifitseerimine. Viirusevastaste ravimite jätkuva kasutamise korral väheneb teie arv. Teraapia eesmärk on saavutada PCR abil kvalitatiivse analüüsi negatiivne tulemus..

Näidustused

Enne suure hulga eralaborite ilmumist, kus patsient saab ilma arsti dokumentideta teha peaaegu kõiki analüüse, anti diagnoosimise või ravi teatud etapis suunis kvantitatiivse PCR-i tegemiseks..

Vastavalt WHO standarditele ja protokollidele on sellise uuringu näidustused:

  • HCV positiivsed seroloogilised markerid (anti-HCV üldsisaldus, klassi G ja / või M immunoglobuliinide olemasolu);
  • kvaliteetse PCR-i positiivne tulemus;
  • ravi jälgimine.

Soovi korral saab patsient iseseisvalt pöörduda erakliinikusse ja viia läbi sarnase uuringu. Kuid C-hepatiidi puudumisel peetakse sellist laboratoorset testi sobimatuks.

Millised haiguse staadiumid me oleme

Viiruse koormuse määramiseks järgmised kuupäevad:

  • enne ravi alustamist (võimalik, et samaaegselt genotüpiseerimisega);
  • 4 ravinädalat (negatiivsed andmed näitavad kiiret viroloogilist vastust ja ennustavad ennustatavaid tulemusi);
  • terapeutilise ravikuuri viimane nädal (12 või 24, sõltuvalt valitud skeemist), negatiivne tulemus kinnitab ravi efektiivsust, positiivne nõuab täiendavat ravi, kuid teiste ravimite kasutamisega;
  • 24 ja 48 nädalat pärast ravikuuri lõppu (sõltumata selle kestusest) kinnitab viirusekoormuse puudumine taastumist.

Lisaks viiakse uuring läbi ainult vastavalt näidustustele (näiteks tervise halvenemine, vead tablettide võtmisel, kaasuvate infektsioonide tuvastamine jne). PCR ei välista vajadust muude analüüside järele - vere ja uriini kliinilised uuringud, maksanalüüsid, ultraheli ja muud.

Kuidas uuringuks valmistuda?

Selleks, et PCR-analüüsi dekodeerimine ei oleks ekslik, on vaja vereproovide võtmiseks korralikult ette valmistuda. Mõne erandiga ei erine reeglid teiste uuringute reeglitest..

See on vajalik:

  • annetage verd rangelt tühja kõhuga (viimane söögikord 12 tundi enne labori külastamist);
  • protseduur viiakse läbi hommikul (võimalikult vara);
  • analüüsi päeval võite pärast ärkamist juua ainult vett; tee, kohv, sooda ja / või magusad joogid, mahlad jne. vastunäidustatud;
  • 3-5 tundi enne vere annetamist ei saa te suitsetada;
  • kui ravimite kasutamist on võimatu lõpetada, öelge laboratoorsele abistajale ravimite nimed ja andmeid tõlgendavale arstile.

C-hepatiidi esinemine eeldab juba alkoholi täielikku tagasilükkamist ja ranget dieeti (tabel nr 5). Kuid kui analüüs viiakse läbi diagnoosimisetapis, 5–7 päeva enne vereproovide võtmist, on toitumise jälgimine kohustuslik, välja arvatud maksa rasked tooted ja alkohol.

C-hepatiidi kvantitatiivse analüüsi dešifreerimine

Tavaliselt kuvatakse vormil normaalväärtused, saadud väärtused ja lühike tõlgendus, kui patsient saab kätte saadud testide tulemused. Kuid C-hepatiidi vereanalüüsi dekodeerimine peaks toimuma ainult arsti poolt. Kvantitatiivne PCR on üks diagnoosimise etappe, seetõttu võrdleb arst arvandmeid varem saadud tulemustega.

Sõltuvalt saadud indikaatoritest määratakse viiruse koormus või HCV RNA täielik puudumine kehas.

Kui tehakse C-hepatiidi kvantitatiivne analüüs, dekrüpteeritakse vastavalt tabelile:

Näitaja väärtusViirusekoormuse tase
RNA-viirust ei tuvastatud (või eksemplaride arv on väiksem kui katsesüsteemi tundlikkus)Tavaliselt on inimene terve või analüüs viidi läbi patoloogia inkubatsiooniperioodil
1,8 × 102–7,9 × 105 RÜ / mlMadal viirusekoormus. Näitab hiljutist nakkust, latentsust või viirusevastast efektiivsust.
8 × 102–2,3 × 107 RÜ / mlMõõdukas viirusekoormus. Tavaliselt täheldatakse seda HCV kroonilises vormis. Ravi prognoos on arsti soovituste kohaselt soodne
2,4 × 107 RÜ / ml ja suuremKõrge vireemia. Tõsised tüsistused (kuni maksavähini) on väga tõenäolised

Analüüsi täpseks dekrüptimiseks ja ekslike tulemuste vältimiseks on kvantitatiivse PCRi andmeid võimalik hinnata alles pärast kvalitatiivse PCRi seroloogiliste markerite tuvastamist. IFA puhul on positiivne koefitsient tingimata näidatud. Samuti võtke uuringu korral arvesse ultraheliuuringute, elastograafia ja biopsia andmeid.

Norm

PCR-i kvantitatiivne analüüs viiakse läbi ainult juhul, kui muud vereanalüüsid on C-hepatiidi suhtes positiivsed.

Negatiivse tulemuse saamiseks on võimalik:

  • enesetervendamine (meditsiinilises kirjanduses on statistika, mille kohaselt umbes 15% HCV nakkustest jääb märkamata, inimese immuunsüsteem kõrvaldab viiruse täielikult);
  • varane viroloogiline vastus (tulemuste hindamisel viirusevastase ravi ajal);
  • varasemate uuringute ekslike andmete korral (see on ebatõenäoline, kuna tavaliselt määratakse kõigepealt ELISA, kõrge kvaliteediga PCR ja maksanalüüsid).

Kui viroloogilise koormuse hindamiseks antakse C-hepatiidi test, teeb ärakirja arst. Arvatakse, et normaalsed näitajad on HCV RNA täielik puudumine veres. Kuid varjatud infektsiooni välistamiseks soovitatakse uuringut mõne nädala jooksul korrata..

Milline vere arv näitab C-hepatiiti

Enne diagnostilise uuringu alustamist peate täpselt teadma, millised vereanalüüsid näitavad HCV-d. Ühelt poolt võimaldab see patsiendil vältida tarbetuid analüüse tarbetuid rahalisi kulutusi, teisalt aitab see kokku hoida aega.

Nii et C-hepatiidi korral on järgmised andmed soovituslikud:

  • positiivne ELISA, sõltumata tuvastatud antikehade klassist; kuid seda parameetrit hinnatakse muude tulemuste taustal, kuna mõned immuunsussüsteemi omadused võivad mõjutada uuringu täpsust;
  • positiivne kvalitatiivne PCR (meetodi tundlikkus ja spetsiifilisus ulatub 100% -ni);
  • viiruse koopiate arvu määramine kvantitatiivse PCR-i ajal.

HCV kaudseteks tunnusteks on maksa transaminaaside liig, bilirubiin, leukotsütoos, kiirenenud ESR, bilirubiini sisaldus uriinis.

Tulemuste dekodeerimisel võetakse arvesse vähendusi, kuna C-hepatiit on analüüsides näidustatud. Tavaliselt on viiruse sisaldus näidatud RÜ / ml või RÜ / ml ja viiruse RNA on ingliskeelne lühend RNA HCV.

Kas on olemas vale test

Vastupidiselt ELISA-le on vale PCR-i tulemuse tõenäosus praktiliselt null. Vead on võimalikud ainult inimfaktori tagajärjel, see tähendab, et rikutakse vereproovide võtmise, proovide säilitamise ja uuringu otse läbiviimise reegleid.

PCR kvantifitseerimise eelised

Hepatoloogia valdkonna spetsialistid rõhutavad, et kvantitatiivsel PCR-il pole analooge ja see on üks peamisi uuringuid HCV-ga patsientide jaoks. Analüüsimootor vähendab valepositiivsete või valenegatiivsete tulemuste tõenäosust..

Tulemuste saamiseks kulub mitu päeva. Vereproovide võtmine ei vaja spetsiaalset ettevalmistamist, see on võimalik peaaegu igas kliinilises laboris ja sellega ei kaasne olulist valu. Kuid selle analüüsi peamine eelis on kõrge täpsus, ulatudes 100% -ni.

C-hepatiidi kvalitatiivne PCR-analüüs

Hepatoloog

Seotud erialad: gastroenteroloog, terapeut.

Aadress: Peterburi, akadeemik Lebedev St., 4/2.

Hepatiit on tõsine haigus, millel on palju põhjuseid. Selle arengu keskmes on otsene või kaudne maksakahjustus. Arvestades selle olulisust kogu organismi jaoks, võib vaid arvata, kui keeruline on patoloogia. Selles artiklis analüüsime üksikasjalikumalt C-hepatiidi kulgu ja laboratoorset diagnoosi.

Haiguse põhjustajaks on viirusetekitaja, mis viitab RNA-d sisaldavatele patogeenidele. Sellel on eristav omadus - võime muteeruda, see tähendab muuta selle struktuuri. Seetõttu väldib infektsioon immuunsussüsteemi rünnaku ja viib enamikul juhtudel kroonilise põletikuni maksas.

Arvestades viiruse erinevate alatüüpide olemasolu, tuleks ravimite valimisel lähtuda genotüpiseerimise tulemustest. Hoolimata pikaajalisest uuringust haiguse ja HCV struktuursete tunnuste kohta ei ole siiani olnud võimalik haiguse vastu spetsiifilist vaktsiini välja töötada..

Varase diagnoosimise raskused on asümptomaatiline hepatiit, mille tagajärjel läheb inimene tsirroosi staadiumis arsti juurde. Haiguse õigeaegseks avastamiseks on vaja regulaarset arstlikku läbivaatust. Ainult laboratoorsete vereanalüüside abil on võimalik HCV-d tuvastada ja teiste nakatumist vältida. Fakt on see, et infektsiooni kandja ei saa pikka aega patoloogiat arvata ja jätkata viiruse edastamist tervetele inimestele.

Ülekande viisid

Enamasti levib viirus läbi vere, kuna see sisaldab kõige kõrgemat patogeensete ainete kontsentratsiooni. Seega nakkus kandub edasi:

  • hemodialüüsiga;
  • nakatunud nõelaga süstimisel;
  • võitluse käigus, kui nahk on vigastatud ja toimub vere kontakt;
  • vereülekandega (vereülekanne).

Intiimsusega nakatumise tõenäosus on tühine, kuna sperma ja tupest väljutamine sisaldab vähesel määral patogeene. Nakkusoht suureneb märkimisväärselt suguelundite limaskesta terviklikkuse rikkumisega. Seda täheldatakse agressiivse ja anaalseksi korral.

Nakkuse edasikandumise vertikaalse meetodi osas viiakse see läbi sünnitusprotsessis. Raseduse perioodil ei saa patogeen tungida embrüo platsenta. Looduslike sündide korral levib patogeen lapsele, kui tema nahk on vigastatud, kui täheldatakse kokkupuudet ema verega..

Pärast patogeeni sisenemist tervislikku kehasse algab antikehade süntees, mis kaitsevad nakkuse eest ja kuuluvad immuunsüsteemi struktuuridesse. Need leitakse esmase uuringu käigus inimeselt, kes kasutab ELISA-d.

Diagnoosi kinnitamiseks läbib patsient polümeraasi ahelreaktsiooni. See on analüüs patogeeni geneetilise materjali tuvastamiseks ja viiruse koormuse määramiseks..

C-hepatiidi laboratoorsed diagnoosid

Laboratoorsed diagnoosid algavad ensüümidega seotud immunosorbentanalüüsiga. Selle peamine ülesanne on patogeeni vastu toodetud antikehade tuvastamine. Selle efektiivsus on peaaegu 95%. Tänu sellele uuringule on prekliinilises staadiumis võimalik viirusekandjat tuvastada ja edasiseks uurimiseks saata.

Kvalitatiivne ELISA näitab immunoglobuliinide olemasolu või puudumist patsiendi veres. Selle tulemus võib olla “positiivne” või “negatiivne”. Esimese vastuse saamisel saadetakse isik järgmisele eksamile - PCR-le. Selle hind sõltub reaktiivide ja labori kvaliteedist. Polümeraasi ahelreaktsiooni maksumus võib ulatuda 4 tuhande rublani.

PCR omadused

Polümeraasi ahelreaktsiooni abil võimaldab isegi väike kogus bioloogilist materjali hinnata viiruse koormust veres, see tähendab arvutada patogeenide kontsentratsiooni vedeliku milliliitris.

PCR-i tulekuga on hepatiidi diagnoosimine muutunud palju lihtsamaks. Analüüs võimaldab tuvastada HCV RNA-d, teha kindlaks nakkusprotsessi staadium ja viirusekandja nakkavus.

Geneetilist diagnoosi on mitut tüüpi:

  1. C-hepatiidi PCR-i kvalitatiivne analüüs - kinnitab HCV olemasolu või puudumist uuritava veres:
  2. kvantitatiivne, tänu millele saate arvutada viiruste kontsentratsiooni ja kindlaks teha haiguse staadiumi. Tulemus antakse RÜ / ml või koopiatena / ml (sõltuvalt laborist);
  3. genotüpiseerimine - vajalik HCV genotüübi määramiseks. See on vajalik ravimite täpseks valimiseks, mis sel juhul on kõige tõhusamad. Analüüs näitab kaudselt patoloogilise protsessi raskust maksas. Niisiis, kolmanda patogeeni genotüübi korral täheldatakse kõige sagedamini steatoosi, mille areng põhineb rasva kogunemisel hepatotsüütides (selle rakkudes). Lisaks mõjutab viiruse tüüp terapeutilise ravikuuri tulemust ja kestust..

C-hepatiidi kvalitatiivne PCR-analüüs

Kõigepealt uuritakse laboris bioloogilist materjali HCV RNA olemasolu suhtes. Oluline on meeles pidada, et C-hepatiidi kvalitatiivsel analüüsil on teatav tundlikkuse tase ja seetõttu ei saa see alati õiget vastust anda. Sel juhul on soovitatav korrata laboratoorset diagnostikat muude reagentide abil..

Usaldusväärsete tulemuste saamiseks tuleks kasutada katsesüsteeme tundlikkusega vähemalt 50 RÜ / ml..

Diagnostiline tulemus võib olla kas „positiivne“ või „negatiivne“. Kui patogeeni ei leita veres, lõpeb uuring. Kui proovis leitakse patogeen, leitakse viirusekoormuse kvantitatiivne arvutamine..

Valenegatiivne vastus saadakse, kui rikutakse tehnoloogilist protsessi, näiteks satuvad keskkonda patogeeni koopiate ehitamist pärssivad aktiivsed komponendid. Seega ei ole võimalik kuvada vere tegelikku pilti, mille tõttu inimese nakkust ei diagnoosita..

Valepositiivse tulemuse saab juhul, kui bioloogilise materjali kogumise katseklaas ja uuringu keskkond olid saastunud. Lisaks on selline analüüsivastus võimalik segainfektsioonide korral, kui maksa mõjutavad mitmed viirused, näiteks C- ja D-hepatiit.

Kvalitatiivse uuringu näidustused

Arst võib määrata patsiendile kvalitatiivse uuringu C-hepatiidi viiruse RNA tuvastamiseks:

  • ensüümi immuuntesti positiivse või kaheldava vastuse saamisel;
  • diagnoosi kinnitamiseks;
  • viiruskoormuse määramine;
  • haiguse staadiumi määramine;
  • segainfektsiooni diagnoosimine. C-hepatiit mõjutab maksa samaaegselt D-viirusega;
  • terapeutilise taktika määramine patogeeni genotüübi põhjal;
  • viirusevastaste ravimitega ravi ajal toimunud muutuste dünaamika hindamine.

Polümeraasi ahelreaktsiooni eeliste hulka kuuluvad:

  1. tehnika kõrge tundlikkus, mis võimaldab tuvastada nakkuse fakti prekliinilises staadiumis;
  2. patogeeni geneetilise materjali, mitte selle antikehade identifitseerimine;
  3. võime kindlaks teha patogeeni alatüüp;
  4. suur diagnostiline kiirus, kuna materjali ei ole vaja toitainekeskkonnale külvata, vaid piisab spetsiaalsete testimissüsteemide kasutamisest. Inimene saab tulemuse 5 tunni pärast;
  5. universaalsus. Analüüs võimaldab teil tuvastada mis tahes geneetilise materjali (RNA, DNA). Tänu sellele saab arst kinnitada C-hepatiidi ja muud tüüpi haigused (B);
  6. latentse infektsiooni tuvastamise võimalus.

Kvantitatiivsed uuringud

Vereanalüüsis, milles kasutatakse polümeraasi ahelreaktsiooni, on võimalik arvutada patogeenide arv bioloogilise materjali fikseeritud mahus. Indikaator on esitatud RÜ / ml. Tänu analüüsile on võimalik kindlaks teha patsiendi nakkavuse aste, määrata nakkusliku protsessi staadium ja hinnata ka ravimteraapia efektiivsust..

PCR põhjal otsustab spetsialist, millised ravimite annused võivad patogeenide paljunemist blokeerida. Lisaks määratakse viirusevastase ravi kestus ja eluaegne prognoos. Oluline on meeles pidada, et testimissüsteemid on väga tundlikud, seetõttu võimaldab meetod kinnitada inimese nakatumist isegi prekliinilises staadiumis..

Genotüpiseerimine

Pidades silmas patogeeni muteerumisvõimet, on ravi taktika määramiseks ja viirusevastaste ravimite valimiseks vajalik selle genotüüp. Näiteks HCV 1 hepatiidi ravi kestab 48 nädalat, positiivset dünaamikat täheldatakse ainult 60% juhtudest. 2. ja 3. genotüübil on soodsam prognoos. Viirusevastased ravimid on ette nähtud 8 kuuks ja nende efektiivsus ulatub 85% -ni.

Statistika kohaselt registreeritakse HCV 1, 2 ja 3 enamasti Vene Föderatsioonis.

Laborikatse dekodeerimisel võidakse selline vastus näidata - "ei ole trükitud". See tähendab, et patsiendi vereringes ringleb viirus, mida testsüsteem ei suuda ära tunda. Analüüsi tulemus sel juhul näitab inimese nakatumist patogeeniga, mis on antud geograafilises piirkonnas ebatüüpiline.

Kuidas saada usaldusväärseid tulemusi?

C-hepatiidi patogeeni RNA tuvastamiseks kvalitatiivse PCR-uuringu õigete tulemuste saamiseks on vaja järgida laboridiagnostikaks ettevalmistamise nõudeid:

  1. vereproov võetakse tühja kõhuga ja "näljane" periood ei tohiks olla lühem kui 8 tundi;
  2. kaks päeva enne uuringut on soovitatav loobuda alkoholi tarbimisest ja keelduda vürtsikatest, rasvastest ja suitsutatud toitudest;
  3. tühistage vere hüübimist vähendavate ravimite, näiteks hepariini, kasutuselevõtt. Kui need ravimid on välja kirjutatud tervislikel põhjustel, on vaja arsti sellest hoiatada. Lisaks peaks spetsialist olema teadlik teiste ravimite võtmisest, mis võivad mõjutada laborikatse tulemusi;
  4. bioloogilise materjali kogumise eelõhtul ei tohiks füsioterapeutilisi protseduure läbi viia ja pange end tõsisele füüsilisele koormusele..

Analüüsi tulemusi võivad mõjutada mitte ainult verd loovutav isik, vaid ka muud tegurid, nimelt:

  • halb vereproov;
  • bioloogilise materjali veo soovituste mittejärgimine;
  • laboritöötajate ebapiisav väljaõpe;
  • uurimismeetodi mittejärgimine;
  • antikoagulantide (hepariini) sisseviimine vereproovide eelõhtul. See ravimirühm vähendab hüübimist, aeglustades seeläbi reagentide tööd.

Erinevates laborites võib diagnostiline vastus pisut erineda, kuid need vead ei mõjuta uuringu lõpptulemust..

Erilist tähelepanu pööratakse laboris kasutatavatele katsesüsteemide tüüpidele. Sageli eelistatakse kõrge tundlikkusega reagente. See on oluline madala viiruskoormusega patsientide jaoks, kuna seda on raske tuvastada..

Kui sageli tehakse laborikatseid?

Primaarne polümeraasi ahelreaktsioon viiakse läbi inimestele, kellel ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsil tuvastati hepatiidi põhjustaja antikehad. Sel juhul on ette nähtud kinnitada inimese nakatumise fakt ja kindlaks teha haiguse staadium. Lisaks võimaldab analüüs teil kindlaks teha viiruse alatüübi, mis on eriti oluline ravimite valimisel.

Järgmine kohustuslike laboratoorsete uuringute periood on 3 kuud pärast viirusevastase ravi alustamist. Diagnoosimine võimaldab hinnata ravimite efektiivsust, kohandada annust või asendada need.

Lisaks põhitestidele võib PCR-i täiendavalt läbi viia ka 4. ja 24. nädalal pärast ravi algust. Haiguse positiivset prognoosi kinnitab viirusekoormuse vähenemine pärast kolmekuulist ravi. Näiteks peaks see vähenema 1 miljonilt RÜ / ml mitmesaja tuhandeni.

Kui patogeensete ainete kontsentratsioon veres püsib samal tasemel või suureneb veidi, näitab see viirusevastaste ainete ebaefektiivsust ja vajab asendamist. Kasutades ravi lõpus PCR-i, on võimalik patsiendi taastumist kinnitada.

Laboridiagnostika tulemuste korrektseks tõlgendamiseks on vajalik konsulteerimine hepatoloogi või nakkushaiguste spetsialistiga. Arvestades valeanalüüside suurt sagedust ELISA-s, kasutatakse analüüsi eranditult esmaseks sõeluuringuks. Patsiendi põhjalikumaks uurimiseks kasutatakse polümeraasi ahelreaktsiooni..

Täpsed C-hepatiidi testid

C-hepatiidi täpne diagnoosimine toimub ainult laboratooriumis patsiendi vereanalüüside abil. Selleks kasutatakse mitmeid tehnikaid:

  • ensüümidega seotud immunosorbentanalüüs - ELISA, mis võimaldab teil määrata C-hepatiidi antikehade olemasolu. Haiguse arengu erinevatel etappidel tuvastatakse veres mitut tüüpi antikehi - IgM, IgG;
  • polümeraasi ahelreaktsioon - PCR on tõhus ja täpne 100% C-hepatiidi analüüs, kuna see võimaldab teil otseselt tuvastada C-hepatiidi viiruse RNA, mitte selle antikehi.

Erinevates tingimustes võivad mõlemad uuringud anda valepositiivseid ja valenegatiivseid testi tulemusi, nii et kõige täpsema diagnoosi saamiseks saab diagnoosi täpset pilti anda ainult nende tulemuste kombineerimine. Kui ELISA meetod andis positiivse tulemuse, tehakse kindlasti hepatiidi C PCR-analüüs. Kui see annab ka positiivse tulemuse, diagnoos kinnitatakse ja patsiendile öeldakse, et tal on hepatiit C. Kui ELISA test on positiivne ja PCR on negatiivne, see tähendab, et inimene on terve! Sageli juhtub see pärast C-hepatiidi ravi või pärast C-hepatiidi ülekandumist ägedas vormis, mille keha täielikult ravib.

Selliseid juhtumeid esineb ka. Ligikaudu 15-20% patsientidest võib haigestuda ilma seda teadvustamata ja ise oma tervise paranemiseks pingutusi tegemata!

Pärast C-hepatiidi ravi tehakse aasta läbi regulaarselt PCR-test, et kontrollida stabiilse viroloogilise vastuse esinemist. Lisaks kvalitatiivsele vereanalüüsile PCR-i abil tehakse ka vereanalüüs viiruskoormuse ja hepatiit C viiruse genotüübi määramiseks.Normaalväärtus on viirusekoormuse puudumine. Pärast ravi võib viiruse genotüüp muutuda. See viitab sellele, et valitsev genotüüp on edukalt välja ravitud, kuid nüüd tuleb ravida teist. On olnud juhtumeid, kui patsiendil oli kolm hepatiit C genotüüpi. See nõuab tõsist pikaajalist ravi. Viiruse genotüübi analüüs näitab ainult C-hepatiidi viiruse genotüübi olemasolu veres.

C-hepatiit, kuidas teda lüüa?

C-hepatiidi lüüasaamiseks ei pea te mitte istuma ega lootma imele või alternatiivsele ravimile, vaid minema hepatoloogiakliinikusse, kus kogenud arstid ravivad C-hepatiiti. Arsti kogemus on teraapia õnnestumisel ülimalt oluline, kuna ainult ravis kasutatavad teooriad sellest keerulisest viirushaigusest ei piisa! Tänapäeval kasutatakse lisaks klassikalisele C-viirushepatiidi - interferooni ja ribaviriini - ravimeetodile uue põlvkonna ravimite - Harvoni - uusimat raviskeemi. See on Ameerikast pärit ravimifirma toode, mis sisaldab kahte uut ravimit - Sofosbuvir ja Ledipasvir. Neil on viirusele täiesti erinev mõju, mis võimaldab kiiret ja tõhusat ravi..

C-hepatiit ja kõhukinnisus

C-viirushepatiit põhjustab häireid seedetraktis. Patsientidel võib esineda iiveldust, suu kibedust, kõrvetisi, väljaheitehäireid - kõhulahtisust või kõhukinnisust, samuti puhitust ja kõhupuhitust..

C-hepatiidi kvalitatiivne analüüs: ärakiri

C-viirushepatiidi arengu põhjus on nakkus patogeeniga, mis kuulub Flaviviridae perekonda. Nakkuse ja antikehade tootmise alguse vahel tuvastatakse pikk ajavahemik, mis ei võimalda haiguse õigeaegset diagnoosimist ensüümidega seotud immunosorbentanalüüsi abil.

Infektsiooni kahtluse korral tehakse C-hepatiidi PCR-analüüs, biokeemia, OAC ja maksafunktsiooni testid. Polümeraasi ahelreaktsiooni abil saab viiruse tuvastada veres isegi nakkuse esimesel nädalal, mis on meetodi domineeriv eelis.

C-hepatiidi kvantitatiivne ja kvalitatiivne analüüs ning uuringu tunnused, kuidas ette valmistada, kas on vigu, dekodeerimine - kaalume üksikasjalikult.

Mis on polümeraasi ahelreaktsiooni meetod??

Polümeraasi ahelreaktsioon - molekulaarne uurimismeetod viiruse tekitaja geneetilise materjali määramiseks alates nakkuse esimestest päevadest. Analüüsi iseloomustab kõrge usaldusväärsus, spetsiifilisus, täpsus. Tänu sellele tuvastatakse mitte ainult viiruse puudumine / olemasolu, vaid ka viiruse koormus (kvantitatiivne väärtus), genotüüp.

Uuring nõuab patsiendi verd, milles väidetavalt asub viirusnakkuse RNA. Laboratoorsetes tingimustes lisatakse bioloogilisele vedelikule praimereid - need on soovitud pikkusega soovitud geeni kunstlikult sünteesitud fragmendid. Pluss RNA polümeraas on spetsialiseerunud ensüüm, mis korrutab soovitud materjali kontsentratsiooni suurenemisega..

Edasi kuumutatakse ja jahutatakse komponentide lisamisega verd spetsiaalses seadmes mitu korda. Seejärel analüüsitakse saadud tulemusi, võrreldakse viirusagensi teadaolevate geenidega. Selle põhjal tehakse järeldus haiguse kohta.

PCR-uuringute tüübid

C-hepatiidi PCR-analüüsi viiakse läbi laboratooriumis koos vajalike reaktiivide lisamisega, sellel on kolm eristatavate omadustega sorti:

  1. C-hepatiidi kvalitatiivne PCR-analüüs on uuringu esimene samm. Selle kaudu tuvastatakse patogeeni geneetiline materjal vereseerumis.
  2. Kvantitatiivne uuring võimaldab teil hinnata viiruse koormust - see on viiruse sisaldus patsiendi veres 1 ml-s. See viiakse läbi enne ravikuuri algust ja seejärel pärast 1-4-12 nädalat kestnud ravi. Kui kuur on pikk, tuleb selle efektiivsuse hindamiseks läbi viia uuring pärast 24-ravinädalat.
  3. Genotüpiseerimine. Nakkushaigus areneb kiiresti, viirus kipub muteeruma. Seetõttu on vaja kindlaks teha viiruse genotüüp.

Teadlased on tuvastanud 7 viiruse genotüüpi. Vene Föderatsioonis olid 1-2-3 liiki väga levinud.

Igat genotüüpi iseloomustab vastupidavus ravile..

Näiteks 1. tüübi korral on ravi efektiivsus umbes 60%, võrreldes 2–3 tüübiga, ulatub näitaja 85% -ni.

Õige ravimi, ravi kestuse valimiseks on vaja välja selgitada mitte ainult nakatumise fakt, vaid ka viiruse kontsentratsioon, selle genotüüp.

Näidustused

Hepatiidi, PCR ja ELISA markerid, muudel uuringutel on teatud meditsiinilised näidustused:

  • Kui patsiendil on varem olnud HIV-nakkus, AIDS.
  • Kontakt nakatunud inimesega, kuna viirushepatiit on väga nakkav.
  • Maksatsirroosi sümptomid - hepatomegaalia, põrna suuruse suurenemine, kõhule ilmnes venoosne muster jne..
  • Maksafunktsiooni häire kliinikus - perioodiline / pidev valu paremas hüpohondriumis, naha kollasus, iiveldus.
  • Kõrged ASAT ja ALAT väärtused vere biokeemias.
  • Raseduse ajal, kui halvad maksafunktsiooni testid.
  • Enne viirusevastase ravikuuri alustamist viiruse koormuse määramiseks.
  • Teraapia efektiivsuse jälgimiseks.
  • Pärast ravi viirusinfektsiooni taastekke vältimiseks.

PCR viiakse läbi kinnitatud hepatiit B diagnoosiga, et välistada maksakahjustuse segavorm.

Uuringu ettevalmistamine ja proovide võtmine

Kuidas analüüsideks ette valmistada, ütleb arst. Täpse tulemuse saamiseks on patsiendil soovitatav ettevalmistus. See koosneb järgmistest soovitustest:

  1. Analüüs tuleb teha hommikul tühja kõhuga. Enne vereproovide võtmist on lubatud juua ainult puhast, gaseerimata vett. Viimane söögikord - 8 tundi enne tara.
  2. Kui te ei saa testi hommikul läbi, saab seda teha õhtul või lõuna ajal, mis kõige tähtsam - 5-6 tundi pärast söömist, mitte varem.
  3. 48 tundi enne uuringut loobuge alkoholist, kofeiiniga jookidest, mahladest.
  4. 2 päeva jooksul peate järgima dieeti, välistades kõik kahjulikud tooted. Kuid mõned arstid usuvad, et rasvased, praetud toidud ei mõjuta PCR-uuringute täpsust..

Ärge võtke ravimit 24 tundi enne meditsiinilist manipuleerimist. Kui see pole võimalik, teavitage sellest oma tervishoiuteenuse pakkujat. Analüüsi ei soovitata teha kohe pärast ultraheli, CT, massaaži ja muid füsioterapeutilisi protseduure.

Vereproovid on järgmised:

  • Spetsiaalse žguti abil, mis on pingutatud patsiendi käsivarrel, peatab arst venoosse verevoolu. Veenid muutuvad nähtavamaks, mis hõlbustab nõela sisestamise protseduuri, sellele järgnevat vereproovide võtmist.
  • Enne steriilse nõela sisestamist töödeldakse nahapiirkonda alkoholi sisaldava vedelikuga.
  • Veeni sisestatakse nõel, mille järel kinnitatakse sellele toru, millesse veri siseneb.
  • Pärast nõela sisestamist žgutt eemaldatakse. Koguge vajalik kogus verd, eemaldage nõel.
  • Süstekohale kantakse alkoholiga kastetud vatitupsu..

Verevalumite tekkimise vältimiseks süstekohal tuleb puuvillane tampoon tugevasti suruda vigastatud piirkonda, painutada käsi ja hoida selles asendis 3-4 minutit.

Kui patsient võtab ravimeid, mis aitavad verd vedeldada (aspiriin, varfariin), võib verejooksu peatamisega olla teatud probleeme..

PCR eelised teiste testide ees

Polümeraasi ahelreaktsiooni meetodil on teiste diagnostiliste meetodite ees teatud eelised..

Uuringu eelised on esitatud tabelis:

Patogeeni otsene diagnoosimineMuud uuringud annavad vastuse - kas kehas on patogeeni või mitte. Kuid kasutades PCR-meetodit, saate konkreetselt kindlaks teha viiruse tekitaja tüübi.
Uuringu spetsiifilisusPCR määrab kordumatu DNA fragmendi, mis vastab ainult ühele viiruseagenti tüübile. See vähendab vigade võimalust..
Suur tundlikkusIsegi viiruse väikest kontsentratsiooni veres on võimalik tuvastada..
Kõigi patogeenide identifitseerimineUuringu ajal saate tuvastada kõik patogeensed mõjurid.
Varjatud infektsioonidLisaks viiruspatogeenile on võimalik tuvastada varjatud kuluga nakkusi, mida iseloomustab kõrge antigeenne toime.

Kui patsient saab positiivse tulemuse, tähendab see, et bioloogilises vedelikus on tuvastatud hepatiidi patogeeni geneetiline materjal. Negatiivne tulemus - viirusest pole jälgi.

Tulemuste dešifreerimine

Arst peaks tulemused dekrüpteerima, tuginedes järeldusele, mille patsient saab laboris. Andmeid on vaja analüüsida koos biokeemia, OAC, ultraheli näitajatega.

Kvaliteet

Kvalitatiivne uuring näitab viirushaiguse põhjustaja olemasolu või puudumist inimese veres. Võimalusi võib olla kaks - negatiivne (norm) või positiivne tulemus.

Vorm ütleb mõnikord: tuvastatud või ei leitud.

Positiivne tulemus - labori assistent paljastas patsiendi veres viiruse tekitaja geneetilise materjali, nakkus kinnitatakse. Negatiivne järeldus - nakkuseta, viiruse RNA fragmendid jäävad tundlikkuse piiridest allapoole.

Kvantitatiivne

Kvantitatiivne analüüs hõlmab mitut tulemusvõimalust. Mugavuse huvides esitame need tabeli kujul.

TulemusDekrüptimine
NegatiivseltSee on terve inimese norm. Seetõttu ei sisalda uuritud bioloogiline materjal viirushepatiidi RNA-d või selle sisaldus on väiksem kui vastuvõtlikkuse künnised.
Kuni 1,8 * 10 ^ 2 RÜ / mlSelles öeldakse, et RNA sisaldus on väiksem kui kvantifitseerimise vahemik. Seda tulemust tuleks tõlgendada hoolikalt, sest seda peetakse vastuoluliseks. Lisaks viiakse hilisemaks võrdluseks läbi ka muud uuringud. Samuti korratakse PCR-testi..
Kuni 8 * 10 ^ 5 RÜ / mlMadal viirusekoormus. Reeglina tähendab selline tulemus ravi efektiivsust..
Alates 8 * 10 ^ 5 RÜ / mlSuur viiruskoormus. Ravi on vaja kohe (kui seda ei tehta) või on vajalik ravimite korrigeerimine.
2,4 * 10 ^ 7 RÜ / mlRNA on suurem kui ülemine kvantifitseerimise maksimum. Sellise tulemuse taustal ei hinnata viirusekoormust. Kehavedeliku proovi on vaja korduvalt lahjendada..

Genotüpiseerimine

Tulemus - tuvastati spetsiifilise genotüübi ribonukleiinhape. Lisaks genotüüp ja alamtüüp kodeerib laborandi järeldus ladina tähtede ja numbritega. Näiteks genotüüp 1a. Kokku 7 genotüüpi, 67 alatüüpi.

Tulemus - tuvastati C-viirushepatiidi RNA - see on haruldase genotüübiga DNA, mida ei saa omistada tavalistele viirusetekitajatele, seetõttu on vajalik täiendav diagnostika.

Kui PCR on negatiivne ja ELISA on positiivne

Hepatoloog või nakkushaiguste spetsialist dekrüpteerib labori abistaja järeldused. Alati on oht saada valenegatiivne või valepositiivne tulemus. Mõnikord juhtub, et PCR on negatiivne ja ELISA on positiivne.

See tähendab, et praegu pole patsiendi veres viirust, kuid ta kannatas ägeda haiguse all. Üldiselt on aktsepteeritud, et ELISA näitab antikehi, mida immuunsüsteem produtseerib pärast patogeeni tungimist..

ELISA-d võrreldes PCR-iga iseloomustab madal usaldusväärsus ja usaldusväärsus, seetõttu kasutatakse seda esmase sõeluuringuna. Diagnoosimisel viirushepatiit ilma polümeraasi ahelreaktsiooni ei saa teha.

C-hepatiidi testi maksumus

Võite teha analüüse haiglas, kus patsienti jälgitakse, kui tal on oma labor, või võtke tasu eest ühendust erakeskusega.

Lühikese aja jooksul saate tulemuse saada laborikeskustes nagu Hemotest, Invitro, Helix.

Uurimistöö maksumus sõltuvalt laborist:

Labiteenuse nimiHinnapoliitika
Helix· Bioloogilise materjali kogumise maksumus - 170 rubla.

· Kvalitatiivne + kvantitatiivne PCR-test - 3990 rubla.

· Viirushaiguse antikehade tuvastamine - 1500 rubla (2-3 päeva).

· Viiruse aktiivsuse kontrollimine enne ravikuuri alustamist - 4090 rubla.

Invitro· C-hepatiidi viiruse RNA kvantitatiivne tuvastamine PCR abil - 3140 rubla.

· Bioloogilise materjali (venoosne veri) tarbimine - 199 rubla.

· Viirusekoormuse hindamine reaalajas tuvastamisega - 18 000 rubla.

· Kvaliteetne ülitundlik test - alates 3000 rubla.

· Genotüpiseerimine - alates 1250 rubla.

Hemotest· Kvantitatiivse uurimistöö hind on 2200 rubla.

· Kvaliteetne diagnostika alates 700 rubla.

· Patogeeni RNA määramine - alates 4000 rubla.

· Vereproovid veenist umbes 150 rubla.

Uuringu kestus on keskmiselt 2-3 päeva. Mõnes laboris pakutakse teenust kiireloomulise analüüsina, selle maksumus on 1,5–2 korda suurem. Vere annetamiseks on võimalik helistada ka eriarsti koju ning labori poole pöördudes saada tulemusi e-postiga või isiklikult.